Что такое серологические исследования, для чего они проводятся, каковы основные методы серологической диагностики?

Серологические исследования — это методы изучения антигенов или антител в биологическом материале больных, основанные на определенных реакциях иммунитета. Обнаружение в биологическом материале антител к возбудителю инфекции или антигенов позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследования не обладают 100% специфичностью и чувствительностью при диагностике инфекционных заболеваний. Поэтому оценивать их результаты нужно с учетом клинической картины заболевания. Этим обусловлена необходимость использования для диагностики инфекции нескольких тестов, а также применение методов Western-blot, подтверждающих результаты скрининговых методов.

«Иммуноблоттинг (Вестерн-блот, Western-blot) является фактически конечным верификационным (подтверждающим) методом в цепи иммунологических исследований, которые позволяют сделать окончательное лабораторное заключение. Особенно важный данный тест для подтверждения или опровержения инфекционного заболевания (например, коклющ, боррелиоз и т.д.). Метод Вестрен-блота, как правило, необходим после обнаружения положительных антител класса IgG инфекционного процесса, т.к. именно в такой комбинации происходит более правильная лабораторная интерпретация результатов и дальнейшая тактика лечения пациента. Для постановки Вестерн-блота используют специальные нитроцеллюлозные полоски, на которые методом горизонтального и затем вертикального иммунофореза перенесены белки в порядке нарастания молекулярного веса. Антитела сыворотки пациента взаимодействует с белками в определенных зонах полоски, а дальше происходит ход реакции аналогичный иммуноферметному анализу (ИФА)»,- объясняет к.мед.наук, медицинский директор лаборатории СИНЭВО Украина, Оксана Владиславовна Небыльцова.

Биологический материал, используемый для серологического исследования

• Сыворотка крови
• Слюна
• Фекальные массы

Для диагностики каких состояний используются серологические исследования

Целью серологических исследований является установление эффективности проведенного лечения после выздоровления пациента, а также обнаружение рецидива заболевания. Кроме того, серологические методы могут выявить такие заболевания как:

• Амебиаз
• Лямблиоз
• Описторхоз
• Трихинеллёз
• Токсоплазмоз
• Токсокароз
• Цистицеркоз
• Эхинококкоз
• ЗППП

Основные методы, используемые в серологической диагностике

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, метод Кунса)

Разновидности метода:

Прямой: микробы или антигены тканей или микробы обрабатваются специальными сыворотками с антителами, а также меченными флюорохромами, которые светятся в УФ-лучах. Бактерии, таким образом, светятся в виде каймы зеленого цвета по периферии клетки. Наблюдается в люминисцентном микроскопе.

Непрямой: мазки обрабатываются антителами антимикробной кроличьей сыворотки. Затем антитела, которые не связались с антигенами микробов, отмываются. Таким образом, выявляются оставшиеся на микробах антитела. В итоге, образуется комплекс микроб + антикроличьи антитела + антимикробные кроличьи антитела, помеченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдается в люминесцентном микроскопе.

Для оценки результатов существует четырёхбалльная шкала, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:

+ очень слабое свечение клетки

++ слабое свечение периферии клетки

+++/++++ яркое свечение клетки

Титром реакции считается разведение сыворотки с результатом результат реакции +++ или ++++.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГ)

Реакция пассивной или непрямой гемагглютинации используется при диагностике инфекций, вызванных простейшими, бактериями и риккетсиями.

Методика состоит из нескольких этапов. Сначала эритроциты обрабатываются «отмываются» изотоническим раствором хлорида натрия, после, при необходимости, - раствором танина 1: 20000, далее сенсибилизируются растворимыми антигенами. После обработки буферным изотоническим раствором хлорида натрия, антиген готов к употреблению. Сыворотку разводят в пробирках изотоническим раствором хлорида натрия, после чего к каждой разведенной сыворотке добавляют эритроцитарный диагностикум.

Результаты оценивают по характеру осадка эритроцитов:

+ слабая интенсивность

++ средняя интенсивность

+++ интенсивная реакция

++++ резко интенсивная реакция

Положительным считается результат реакции с интенсивной реакцией +++ или резко интенсивной реакцией ++++, при которых эритроциты покрывают все дно пробирки.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Метод обладает высокой специфичностью и чувствительностью, более 90%. Основное достоинство - возможность выявления инфекции и прослеживания динамики процесса, на который указывает уровень антител.

Применяется анализ для диагностики широкого круга инфекций, в том числе:

• ВИЧ-инфекция
• Вирусные гепатиты
• ЗППП
• Цитомегаловирусная инфекция
• Герпесная инфекция
• Токсоплазменная инфекция

Антиген или антитело фиксируется на твёрдых планшетах, затем, с помощью ферментной метки выявляются комплексы антиген – антитело.

ИФА имеет ряд преимуществ перед остальными серологическими методами. Реакция наиболее чувствительная, а в тестах используются универсальные реагенты. Анализ отличается быстротой, возможностью исследования иммуноглобулинов различных классов. В настоящее время ИФА является одним из основных методов лабораторной диагностики.

Оценка результатов ИФА проводится автоматически с помощью специальных приборов. В некоторых случаях также допускается и визуальный учёт результатов реакции. Достоверность серологической диагностики зависит от организации лабораторного контроля, состоящего из нескольких процедур, предназначенных для оценки качества результатов.

likar.info